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用流式细胞术检测血小板相关抗体

来自 : 发布时间：2024-05-03

实验方法原理实验材料试剂、试剂盒仪器、耗材实验步骤

一种能够通过胎盘存在于血小板表面的免疫球蛋白，被称为血小板相关抗体（PA-IgG）。

羊F（ab+）22IgG-PE抗体血样

洗涤缓冲液

流式细胞仪

一、试剂洗涤缓冲液（PBS/EDTA/BSA），PBS缓冲液，含10mmol/LEDTA和0.5%BSA。抗体：羊F（ab⁺）₂抗-人IgG（FcSp）-R-PE（H10104，Caltag为多克隆抗体）。阴性对照：羊F（ab⁺）₂2IgG-PE（11304，Caltag）。二、样本正常人血样1份，血小板数值在正常范围，具体数目不详。患者血样2份，为1个月龄的双胞胎患者1和患者2，均为贫血血小板，具体数目不详。三、步骤1.用含EDTA抗凝剂的血液收集管采血，3个血样均取2ml，分别加到3支流式标准管中。2.离心500r/min，将上清（富血小板血浆）转到另外3支流式标准管中。3.离心2500r/min3min。吸去血浆，用与血浆等体积的洗涤缓冲液重悬血小板。如果必要，可用旋涡混合器混匀。4.用洗涤缓冲液洗涤血小板3次，每次离心2500r/min3min。5.适量洗涤缓冲液重悬血小板，用血球计数仪测定血小板的浓度，其中正常血样血小板计数为2000/μl，患者1的血小板数为6000/μl，患者2的血小板数为7000/μl（稀释浓度）。6.每个含重悬血小板的流式标准管分为两管。A管为检测管，B管为阴性对照管，共6只管。正常人血样分别取250μl于2支流式标准管（A管和B管）中，每管血小板总数为5×10⁶。分别取80μl患者1的血样于2支流式标准管（A管和B管）中，每管血小板总数为4.8×10⁶。分别取70μl患者2的血样于2支流式标准管（A管和B管）中，每管血小板总数为4.9×10⁶。7.将上述6支流式标准管，于A管均加5μl羊F（ab⁺）₂抗-人IgG（FcSp），B管均加5μl羊F（ab⁺）₂IgG。8.室温，避光孵育15min。用洗涤缓冲液再洗1次，方法同步骤4。9.去上清，加0.5ml洗涤缓冲液重悬，上机分析。 $\"\"$