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用流式细胞术检测血小板相关抗体
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发布时间:2025-01-15
一种能够通过胎盘存在于血小板表面的免疫球蛋白,被称为血小板相关抗体(PA-IgG)。 |
羊F(ab+)22IgG-PE抗体血样 |
洗涤缓冲液 |
流式细胞仪 |
一、试剂 洗涤缓冲液(PBS/EDTA/BSA),PBS缓冲液,含10mmol/LEDTA和0.5%BSA。 抗体:羊F(ab+)2抗-人IgG(FcSp)-R-PE(H10104,Caltag为多克隆抗体)。 阴性对照:羊F(ab+)22IgG-PE(11304,Caltag)。 二、样本 正常人血样1份,血小板数值在正常范围,具体数目不详。 患者血样2份,为1个月龄的双胞胎患者1和患者2,均为贫血血小板,具体数目不详。 三、步骤 1.用含EDTA抗凝剂的血液收集管采血,3个血样均取2ml,分别加到3支流式标准管中。 2.离心500r/min,将上清(富血小板血浆)转到另外3支流式标准管中。 3.离心2500r/min3min。吸去血浆,用与血浆等体积的洗涤缓冲液重悬血小板。如果必要,可用旋涡混合器混匀。 4.用洗涤缓冲液洗涤血小板3次,每次离心2500r/min3min。 5.适量洗涤缓冲液重悬血小板,用血球计数仪测定血小板的浓度,其中正常血样血小板计数为2000/μl,患者1的血小板数为6000/μl,患者2的血小板数为7000/μl(稀释浓度)。 6.每个含重悬血小板的流式标准管分为两管。A管为检测管,B管为阴性对照管,共6只管。正常人血样分别取250μl于2支流式标准管(A管和B管)中,每管血小板总数为5×106。分别取80μl患者1的血样于2支流式标准管(A管和B管)中,每管血小板总数为4.8×106。分别取70μl患者2的血样于2支流式标准管(A管和B管)中,每管血小板总数为4.9×106。 7.将上述6支流式标准管,于A管均加5μl羊F(ab+)2抗-人IgG(FcSp),B管均加5μl羊F(ab+)2IgG。 8.室温,避光孵育15min。用洗涤缓冲液再洗1次,方法同步骤4。 9.去上清,加0.5ml洗涤缓冲液重悬,上机分析。 |
本文链接: http://caltag.immuno-online.com/view-684622.html
发布于 : 2025-01-15
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